Les mutations non-sens liées à des codons stop prématurés dans des lignées cellulaires 16HBEo- corrigées ont une sensibilité différente au système de dégradation des ARNm

Les lignées cellulaires d’expression hétérologue sont d’intérêt limité car elles ne comportent pas d’intron et, dans le contexte de l’étude des mutations non-sens liées à des défauts des codons stop prématurés (PTC), ne permettent pas d’étudier le système NMD dégradant les ARNm porteurs de ces PTCs.

La lignée cellulaire établie par D Gruenert, 16HBE14o- a été immortalisée par SV40 et est sensible au système NMD. Ceci a permis de générer par CRISPR/Cas9 différentes lignées homozygotes pour G542X, W1282X, Y122X, R553X, R1162X, G551D, N1303K, et F508Del dans un contexte V470 ou M470. Pour les mutations non-sens, ces modèles permettent de tester le niveau du système de dégradation des ARNm à l’état basal. Ceci a permis de vérifier que le niveau de transcrit est diminué pour les 3 mutations : G542X, W2283X et Y122X, comme on s’y attend. Ces lignées permettent également une évaluation pharmacologique différentielle, de l’inhibition du NMD par SMG1, un puissant inhibiteur du NMD, et de la translecture grâce à G418. L’inhibition du NMD est testé par le niveau d’ARNm corrigé et la translecture par la restauration de l’activité de CFTR en chambre de Ussing. Par exemple, la mutation W1282X, est très sensible au système NMD mais répond peu à G418, à l’inverse de Y122X.

Ces observations montrent que le contexte du PTC influe sur la translecture et illustrent la relevance de ces lignées cellulaires.

Référence

CONGRES NACFC 2018 - Samedi 20 octobre 2018
In vitro models of CF
W16.4 – Abstract 164 - CFTR PTC variants expressed in gene edited 16HBE14O-cel lines show differential sensitivity to nonsense mediated decay
Speaker : HC Valley